红细胞计数（显微镜计数法）

红细胞计数是血液检查的常规组成部分，有显微镜计数法和自动血细胞分析仪计数法。

• 显微镜计数法是最基本的红细胞计数法，要求理解其原理并能掌握其操作方法。
• 血细胞分析仪法是目前临床上最常见、最简单的红细胞计数法，要求掌握其操作要点。

1.原理

血液经稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每升血液内的数目。

2.器材与试剂

（1）改良式血细胞计数板：临床上最常用的是改良纽巴（Neubauer）计数板，它由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台，两边的平台较中间的平台高0.1 mm。中央平台又有一纵沟相隔，其上各刻有一个计数室。

血细胞计数板

资源描述：临床上最常用的是改良纽巴（Neubauer）计数板，它由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台，两边的平台较中间的平台高0.1 mm。中央平台又有一纵沟相隔，其上各刻有一个计数室。每个计数室深度为0.1 mm。 文件来源：范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

每个计数室划分为9个大方格，每一大方格面积为1.0 mm²，深度为0.1 mm。

• 四角每一大方格划分为16个中方格，为计数白细胞用。
• 中央一大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用。

血细胞计数板中一个计数室全貌

资源描述：每个计数室划分为9个大方格，四角每一大方格（浅灰色，L所指）划分为16个中方格，为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用。 文件来源：网络

（2）盖玻片：专用于计数板的盖玻片呈长方形，厚度为0.4 mm。

（3）红细胞稀释管或沙利吸血管：5ml吸管、中试管。

（4）显微镜。

（5）计数器。

（6）稀释液：0.85%氯化钠溶液。

3.操作方法

（1）稀释

用5 ml吸管吸取红细胞稀释液3.98 ml置于试管中。用沙利吸血管吸取全血样品至20 μL刻度处。擦去吸管外壁黏附的血液，将血液吹入试管底部，再吹、吸数次，以洗净沙利管内黏附的血细胞，然后试管颠倒混合数次。

（2）充液

用毛细吸管吸取已稀释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，让血液稀释液自然流入计数室中静置1～2 min。

血细胞计数板的加样方法

资源描述：用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室中。注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。 文件来源：范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，如果溢出血细胞计数室应清洁后重新加样；过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。

（3）计数

先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的格后，把中央的大方格置于视野之中，然后转用高倍镜。

显微镜低倍镜下所见计数室左上角的白细胞计数大方格

资源描述：四角每一大方格划分为16个中方格，为计数白细胞用。 文件来源：范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

在中央大方格内选择四角与最中间的五个中方格（或用对角线的方法数五个中方格），每个中方格有16个小方格，所以共计数80个小方格。

红细胞计数区

资源描述：计数室中央一大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用。 文件来源：范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

计数室红细胞计数区域

资源描述：计数室中央一大方格用双线划分为25个中方格（每个中方格又被划分为16个小方格），红细胞计数时需要选择其中5个中方格进行计数。5个中方格选择的方法：①四角4个中方格和中央1个中方格；②沿对角线的5个中方格。这里演示的是第①种（5个中方格已经用红色做了标记）。 文件来源：Rebar等编著.夏兆飞主译,犬猫血液学手册,中国农业大学出版社,2007.6

红细胞计数时的一个视野

资源描述：高倍镜下可见每个中方格（双线边框）又划分为16个小方格，红细胞散落其中。计数时注意压在左边双线上的红细胞记在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入，此所谓“数左不数右，数上不数下”的计数法则。 文件来源：范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入，此所谓“数左不数右，数上不数下”的计数法则。

红细胞计数方法

资源描述：计数时为避免看错行，应按照“弓”字形路线进行计数。计数时注意：压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入，此所谓“数左不数右，数上不数下”的计数法则。 文件来源：Rebar等编著.夏兆飞主译,犬猫血液学手册,中国农业大学出版社,2007.6

4.计算

公式说明：

• X——5个中方格（即80个小方格）内的红细胞总数。
• 400——一个大方格，即1mm2面积内共有400个小方格。
• 200——稀释倍数。
• 10——血盖片与计数板的实际高度是1/10mm，乘10后则为1.0mm。
• 上式简化后为： X × 10000＝红细胞数/mm³。

将上述计算结果乘以10⁶，即可将单位换算为 个/L。

5.正常参考值

健康动物红细胞数（×10¹²/L）：

• 犬5.5～8.5；
• 猫5～10。

6.临床意义

（1）红细胞数减少

红细胞数减少见于贫血。每升血液中红细胞数、血红蛋白量及红细胞压积容量低于正常参考值下限时，称为贫血。按病因可将贫血分为4类：

①失血性贫血：慢性失血性贫血见于胃溃疡、球虫病、钩虫病、捻转胃虫病、螨病、维生素C和凝血酶原缺乏等疾病。急性失血性贫血见于丙酮苄烃香豆素中毒、脾血管肉瘤、犬和猫自体免疫性血小板减少性紫癜、手术和外伤等。

②溶血性贫血：见于牛巴贝西虫病、牛泰勒虫病、钩端螺旋体病、马传染性贫血；绵羊、猪、犊牛的甘蓝中毒和野洋葱中毒；新生骡驹溶血病、犬自体免疫性溶血性贫血等。

③营养性贫血：见于蛋白质趣闻发，铜、铁、钴等微量元素缺乏，维生素B₁、B₂、B₆、B₁₂、叶酸、烟酸缺乏等。

④再生障碍性贫血：见于辐射病、猫泛白细胞减少症、慢性粒细胞白血病、淋巴细胞白血病、垂体功能低下、肾上腺功能低下、甲状腺功能低下等。

（2）相对性增多

主要由于血浆容量减少（脱水）所致，即浓血症，见于腹泻、呕吐、多尿、多汗、肠便秘、急性胃肠炎、肠阻塞、渗出性胸膜炎与腹膜炎、热射病与日射病、某些发热性疾病及犬细小病毒病等传染病。

（3）绝对性增多

有原发性增多和继发性增多。

①原发性红细胞增多症又叫真性红细胞增多症，见于骨髓增生性疾病，一般认为是多能干细胞受损所致。其特点是红细胞持续性显著增多，全身总血量也增加。见于肾肿瘤、雄激素分泌细胞瘤、肾囊肿，红细胞可增多2～3倍。

②继发性红细胞增多症是由于代偿作用而使红细胞绝对数增多，与促红细胞生成素（EPO）产生过多有关：

• A．红细胞生成素代偿性增加：因血氧饱和度减低，导致组织缺氧，红细胞生成素增加，骨髓制造红细胞的机能亢进而引起红细胞增多。红细胞增多的程度与缺氧程度成正比。见于高原适应、慢性阻塞性肺病、先天性心脏病（如肺动脉狭窄）、血红蛋白病（如高铁血红蛋白症、硫化血红蛋白症）。
• B．红细胞生成素病理性增加：红细胞生成素增加与肾脏疾病或肿瘤有关，如肾囊肿、肾积水、肾血管缺陷、肾癌、肾淋巴肉瘤、小脑血管瘤、子宫肌瘤、肝癌等。

7.注意事项

（1）防凝、防溶、取样要正确

红细胞计数是一项细致的工作，稍有粗心大意，就会引起计数不准。关键是防凝、防溶、取样正确。

• 取抗凝血时，抗凝剂的量要合适，不可过少使血液部分呈小块凝集；采血时应注意及时将抗凝剂与血液混匀。
• 防溶是指防止过分振摇而使红细胞溶解，或是器材用水洗后未用生理盐水冲洗而发生溶血，使计数结果偏低。
• 取样正确是指吸血10或20µL一定要准确：
• 吸血管外的血液要擦去；
• 吸血管内的血液要全部洗入稀释液中；
• 稀释液的用量要准；
• 充液量不可过多或过少，过多可使血盖片浮起，过少则计数室中形成小的空气泡，使计数结果偏低甚至无法计数。
• 此外，显微镜台未保持水平，使计数室内的液体流向一侧，这些操作上的错误均可使计数结果不准确。

（2）器材清洗方法

血细胞计数板用蒸馏水冲洗后，用绒布轻轻擦干即可，切不可用粗布擦拭，也不能用酒精、乙醚等溶液冲洗。