皮肤病检验技术：皮肤病料采集与压片制备

宠物皮肤病的病因多种多样，细菌、真菌、寄生虫，甚至内分泌因素都可能引起皮肤病。皮肤病常见的症状有脱毛、瘙痒、红疹、疱疹等，往往缺乏特异性，单纯依靠临床症状难以准确做出诊断，因此实验室诊断是减少误诊和漏诊的重要方法，同时对皮肤病的用药及护理也具有十分重要的指导意义。

一、病料采集方法

 皮肤病料的采集方法主要有：

• 透明胶带法：临床使用较少，主要用于怀疑姬螯螨的感染病例；
• 压迫涂片法：适用于有渗出的病灶，如丘疹、脓疱；
• 直接涂片：主要用于耳道、阴道、脓包、口腔、有渗出物的病灶；
• 皮肤刮片：较为常用

一、透明胶带法采集病料

• 利用平常的透明胶带裁剪成载玻片大小。
• 直接去粘取病灶上的皮屑。
• 将粘取病料的透明胶带直接粘在载玻片上镜检即可。
• 临床中比较少用，主要用于怀疑姬螯螨病的检查中。

使用透明胶带采集皮肤病料

资源描述：利用平常的透明胶带裁剪成载玻片大小，直接去粘取病灶上的皮屑。将粘取病料的透明胶带直接粘在载玻片上镜检。临床中比较少用，主要用于怀疑姬螯螨病的检查中。 文件来源：网络

二、压迫涂片法采集皮肤病料

适用于有渗出的病灶，如丘疹、脓包。挤压病灶，当有结痂或是干性丘疹时取出结痂后再挤压，直接用载玻片粘取病料，风干，染色，镜检。注意尽量避免大量的血液出现。

压迫涂片法采集皮肤病料

资源描述：压迫涂片法适用于有渗出的病灶，如丘疹、脓疱等。挤压病灶，当有结痂或是干性丘疹时可取出结痂后再挤压，然后直接用载玻片粘取病料，风干，染色，镜检。注意尽量避免大量的血液出现。 文件来源：网络

三、直接涂片法采集病料

用棉签采集所需要的病料，在载玻片上滚动使病料均匀的粘附于载玻片上，风干染色，镜检。主要用于耳道、阴道、脓包、口腔、有渗出物的病灶。

直接涂片法采集耳道内病料

资源描述：用棉签采集所需要的病料，在载玻片上滚动使病料均匀的粘附于载玻片上，风干染色，镜检。主要用于耳道、阴道、脓疱、口腔以及有渗出物的病灶。 文件来源：网络

四、皮肤刮片

分为浅刮和深刮。剪去采样部位的长毛，将一滴甘油（或矿物油）滴在废旧的手术刀片或病灶之上，挤压皮肤持刀片垂直于皮肤顺毛流方向反复刮取。刮取的病料会粘附于甘油之上，收集病料直接压片镜检，当甘油量少时可适量添加。

皮肤刮片操作方法

资源描述：将一滴甘油滴在废旧的手术刀片或病灶之上，挤压皮肤持刀片垂直于皮肤顺毛流方向反复刮取，直至渗血。刮取的病料会粘附于甘油之上，收集病料直接压片镜检，当甘油量少时可适量添加。 文件来源：网络

将手术刀片钝的一端浸入矿物油（或甘油）中

资源描述：皮肤刮片操作：将手术刀片钝的一端浸入矿物油或甘油中。 文件来源：Susan M. Taylor：Small Animal Clinical Techniques

在刮片前挤压皮肤

资源描述：皮肤刮片操作：在刮片前挤压皮肤。 文件来源：Susan M. Taylor：Small Animal Clinical Techniques

对皮肤进行刮片

资源描述：对皮肤进行刮片，直至出现血清渗出或毛细血管渗血。 文件来源：Susan M. Taylor：Small Animal Clinical Techniques

将病料涂布到载玻片上

资源描述：将刮取的样本涂布到载玻片上的矿物油（或甘油）中，并盖上盖玻片。 文件来源：Susan M. Taylor：Small Animal Clinical Techniques

注意事项：

• 深刮常要见血，所以操作之前需和宠物主人说明。
• 刮片部位由所要找的螨虫类型决定。应熟悉不同螨虫常见的感染部位。
• 检查螨虫时，不要在病变部位的中心区采集病料，而应在病变部位与健康部位的交界处。

疥螨常见于身体受压的部位，如跗关节、肘关节，也见于耳缘。大多数感染犬有极度瘙痒症状。

犬疥螨的多发部位

资源描述：疥螨常见于身体受压的部位，如跗关节、肘关节，也见于耳缘。大多数感染犬有极度瘙痒症状。 文件来源：Susan M. Taylor：Small Animal Clinical Techniques

犬局灶性蠕形螨感染常见于面部（尤其是口、鼻周围）或爪部，而全身性感染则可能见于任何部位。蠕形螨经常深入毛囊内而被称为“毛囊虫”，因此刮片检查前应挤压皮肤。

犬蠕形螨的多发部位

资源描述：犬局灶性蠕形螨感染常见于面部或爪部，而全身性感染则可能见于任何部位。 文件来源：Susan M. Taylor：Small Animal Clinical Techniques

二、压片制备：透明化及染色

一般情况下，皮肤样品的检验须同时进行透明化后镜检和染色后镜检，因此，病料涂片应至少准备2份。

• 用于染色后镜检的涂片，主要用于检验细菌、真菌等，其涂层应较薄，以便于观察；
• 用于透明化后镜检的涂片，主要用于检查寄生虫，稍厚的涂层有利于虫体的集中，以减少观察工作量。

1.透明化

采集好的皮肤病料，若不经任何处理而直接镜检，则视野中会有大量折光不均匀的斑驳皮屑团块，难以清晰地检出寄生虫。因此，皮肤病料应进行透明化处理后再进行镜检。

透明化处理方法主要有2种：KOH透明化和油化透明化。

①KOH透明化：在涂片上滴加1~2滴10%KOH，压上盖玻片后轻微加热。

②油化透明化：在涂片上滴加1滴矿物油（如石蜡油）或甘油，也可用显微镜镜头油或植物油，轻微加热，也可不加热。若加热，透明化程度更好，有时显微镜下课只见到螨虫的几丁质外壳，而基本见不到动物皮肤细胞等，非常便于观察。

注意，对于含水分很多的样品，油化透明化效果可能不如KOH法。

2.染色

皮肤图片染色的方法与血涂片染色基本相同，但滴加蒸馏水后静置时间应缩短至30s以内。皮肤病患犬常出现皮脂腺分泌过多，导致涂片油腻，妨碍染色，此时可适当延长滴加染液及滴加蒸馏水后的静置时间。必要时，可先在涂片上滴加石油醚以脱脂，再进行染色。

皮肤刮削物未透明化和透明化后效果对比

资源描述：犬皮肤刮削物镜检效果。左：未透明化（100×），视野中央的疥螨被皮屑遮盖或沾染过多皮屑而难以分辨；右：油化透明化（100×），经过透明化后，皮屑变得透明，视野中央的疥螨即使被皮屑遮盖也能清晰可辨。 文件来源：范开,董军主编.宠物临床显微检验及图谱,化工出版社

三、注意事项

皮肤被细菌、真菌感染时，局部常出现面积较大的脱毛、皮屑、渗出等。细菌多在毛发、角质层等处聚集，真菌多聚集在角质层及角质层下。所以，对于怀疑是细菌和真菌感染的病例，重点应放在采取皮屑，取样达到角质层即可，不必过分追求深度。

螨等是皮肤寄生虫感染的常见病因。疥螨寄生在皮下的隧道中，蠕形螨常在毛囊中或皮表，其所在区域常出现皮肤脱毛或红色小丘疹等标志。对此类病例，取样范围可局限在丘疹等标志附近，在深度上应保证达到真皮，稍出血即可，面积不宜过大。

皮肤取样时，用利刀的尖部小面积刮取容易取得较多皮屑，既可保证取样的深度， 又不至于造成过大过深的伤口，不引起大面积出血，取样部位的皮肤易于复原，且皮样中只含少量红细胞，对镜检的干扰小（红细胞难于透明化）。

如刀片较钝，往往非反复、用力刮皮而不能取得皮屑，常使采样局部呈现皮肤光亮、皮下出血，类似刮痧后的表现。此时若继续粗暴刮取，可将取样部位的表皮层全部刮脱，使皮肤出现较大、较深的破损，易导致瘢痕形成；且刮得的样品中含大量的红细胞，妨碍镜检。临床上时而见到此类皮损病例，可见瘢痕处色白，无毛发生长。畜主对此常有异议。

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